qpcr误差值计算方法：斜率范围：-1和-59之间△△ct这是相对荧光定量的一个计算公式的简化形式，用于比较不同样品之间的差别或变化比率。
误差值计算方法：绝对误差、相对误差、系统误差、偶然误差。绝对误差：示值与真实值之差的绝对值。相对误差：绝对误差与真实值之比。系统误差：由量具、工具、夹具等所引起的误差。偶然误差：由操作者的操作所引起的（或外界因素所引起的）偶然发生的误差。
误差值计算方法：（A-E）/（E/100）。
阈值= 基线（背景）信号标准偏差*10。（3-15个循环）。当荧光信号大于阈值时，可以肯定是由于PCR的扩增使得荧光强度得以测量。
如果有标准曲线，按照标准曲线计算。一般都是相对量，则用delta delta CT方法来计算。举例如下：对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin）CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
对同一种样本，针对不同基因采用不同的引物进行qPCR，对于每一个样本还得设置一个内参对照。用每个基因复孔CT值的平均值减去内参的平均值求的δCT，再比较各组基因的表达差异。也可以绝对定量，将稀释的标准品和待测样品同时进行qpcr，通过Ct值根据标准曲线求绝对表达量。
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。
首先mRNA逆转录，转成cDNA后，用特异性带荧光标记的引物扩增目标DNA，测定表达水平，这一过程的荧光信息即可被qPCR仪所探测，并反映出来。
学习做Realtime PCR， 实验结果是出来了，得到的内参、目的基因的Ct 值在15-25 之间，熔 融曲线基本上也是单峰，但不太会处理这个结果，对着数据发愁.不同的处理方法得到不 同的结果. 做的是相对定量，SYBR Green， 选用2^（-△ △ Ct）法 内参基因：对照。
pcr柱状图是三个重复的数据可以去掉聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。
不需要。根据相关资料查询显示，如果一起处理可能会导致实验数据出现差错。这三个重复计算需要分别处理，在处理完成后，舍弃掉差别大的实验数据，再求平均.这是平行实验的处理方法。
离群值。 这表示同一组的几个个体之中，有一个/几个非常特殊，数值与其他个体相差很大的，不能够代表这个组而在数据分析时需要剔除的。比如1， 4， 2， 4这四个个体同1， 3， 5， 7这四个个体来比较。如果只看均值，为4比4，无任何差别。
整个过程可以分为以下流程：先从组织、体液或细胞中提取蛋白质，拿到蛋白混合溶液（根据你的研究目的，可以对蛋白先做分离，或者不分离），接下来还原烷基化（还原的过程是将蛋白的二硫键打开，然后烷基化可以修饰巯基，防止游离的巯基再生成二硫键）处理，并酶解成肽段。
